題目：草莓的組織培養與相關培養基的製備
學院：植物保護學院
專業班級：動植物檢疫專0402班
學號：20XX033020203
學生姓名：陳英化
指導教師：趙巖
二〇〇七年六月一日
草莓的組織培養與相關培養基的製備
本次實習主要是學習草莓培養基的製備和草莓的組織培養法，爲以後從事草莓方面的工作與研究打基礎
1 材料和方法：
1.1 供試植物材料：
草莓品種：（1）童子Ⅰ號： 取自河北農業大學草莓試驗田
（2）達塞萊克特：取自河北農業大學草莓試驗田
1.2 草莓組培苗的繁殖：
1.2.1MS培養基的製備
（一）母液的配製：（參見附錄一、二）
（1）1mol·L-1酸鹼配製：稱取4gNaOH，溶解後定容於100ml去離子水中，即配成1mol·L-1NaOH溶液；量取8.4ml濃鹽酸（12mol·L-1），加去離子水定容至100ml，即配成1mol·L-1的鹽酸溶液。
（2）大量元素母液配製（H4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O）一定要分別稱量，分別溶解，再定容。倒入貯液瓶中，貼好標籤（日期、種類、倍數），放入冰箱內（2~4℃）或常溫。
（3）微量元素母液配製（MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O）分別稱量，分別溶解（用蒸餾水或去離子水），定容。貼標籤（日期、種類、倍數），放入冰箱內（2~4℃）或常溫。
（4）鐵鹽母液配製（FeSO4·7H2O、Na2EDTA）：5.57ｇ硫酸亞鐵和7.45ｇ乙二胺四乙酸鈉，分別用450ml去離子水（或蒸餾水）溶解，分別適當加熱並不停攪拌，待分別溶解後，再將2種溶液混合在一起，調整PH值到5.5，最後加蒸餾水或去離子水定容於1000ml，倒入棕色瓶中，貼好標籤放入冰箱保存。
（5）有機物母液配製：（肌醇、煙酸（VB3煙酸胺素（VB1）、煙酸吡多醇（VB6）、甘氨酸）稱量，分別溶解，用蒸餾水或去離子水定容，放入細口瓶中備用，貼好標籤放入冰箱保存。
（6）配製0.2mg·L-1BA（6-苄基氨基嘌呤）：稱20mg加少量1mol·L-1的鹽酸溶解，然後用加熱的蒸餾水定容100ml，配製1L培養基吸取量爲1ml。
（7）配製0.5mg·L-1IBA（吲哚丁酸）：稱50mg加少量95％乙醇溶解，然後用加熱的蒸餾水定容100ml，配製1L培養基吸取量爲1ml。
（二）培養基的配製：
（1）稱蔗糖（分化培養基用30ｇ；生根培養基用20ｇ）、瓊脂5ｇ用涼水調成糊狀。
（2）取一定量的去離子水或自來水（一般是培養基量的80％～90％），加入不鏽鋼鍋內，用電磁爐加熱。母液依次按NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O；MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O；FeSO4·7H2O、Na2EDTA；肌醇、煙酸（VB3）、煙酸胺素（VB1）、煙酸吡多醇（VB6）、甘氨酸順序吸取。
（3）水開後，加入蔗糖和瓊脂，不斷攪拌，開鍋後停止加熱。
（4）將量取好的母液倒入上述已加熱的鍋內，不斷攪拌，使其均勻溶解。
（5）定容（考慮由溫度引起的體積變化）
（6）調整培養基的PH值爲5.8～6.0（用1mol·L-1NaOH溶液和1mol·L-1的鹽酸溶液）。
（7）培養基的分裝每40ml裝入100ml三角瓶，用封口膜封瓶口，再用牛皮紙將瓶口包紮，對培養基及時做好標記。
（8）培養基的滅菌和保存：在壓力錶達0.105～0.120MPa時，滅菌20min，放置2～3d進行觀察，若無污染跡象則可使用［3］。
（9）分化培養基：MS培養基，附加BA0.5mg·L-1，蔗糖30g，瓊脂5g；生根培養基1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+瓊脂5g。
1.2.2外植體的生長與分化
取匍匐莖頂梢剪去葉片，在自來水下衝洗乾淨，取出已長出的小葉。在超淨工作臺上，用70％酒精殺菌30s，用無菌水沖洗3次（3min/次），再用0.1%昇汞泡7~8min，用無菌水沖洗3~5次（5~10min/次）。用無菌尖頭鑷子將匍匐莖莖尖外面的包葉剝去，用鑷子將幼葉一一剝去，切取儘可能小的莖尖（0.1~0.3mm），置於分化培養基中（MS培養基，附加BA0.5mg·L-1，蔗糖30g，瓊脂5g）於光照度3000lx，光周期8~10h，溫度20~28℃條件下培養20d左右［1］。
1.2.3試管苗的生根
取40mlMS生根培養基（1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+瓊脂5g）置於100ml三角瓶中，每瓶接種4株長勢基本相同的試管苗，於光照4000lx，光周期14h，溫度20~27℃條件下培養約30d［2］。
參 考 文 獻
[1]牛建新，魯曉燕，於豔華．外植體和培養因子對草莓不定芽誘導的影響［J］．北方園藝，1999，3：30～31．
[2]甄文超，曹克強，代 麗，等．連作草莓根系分泌物自毒作用的模擬研究［J］．植物生態學報，20XX，28(6)：828～832．
[3]李 雲 主編，林果花菜組織培養快速育苗技術［M］．中國林業出版社．20XX．6．
[4]沈德緒．果樹育種學［M］．上海：上海科學技術出版社，1980．
附錄1—草莓組織培養MS培養基配方［4］
FormulaofMSculturemediumusedinstrawberrytissueculture
母液  Solution | 成分 Composition | 濃度（mg/L） Concentration | 母液 Solution | 成分 Composition | 濃度（mg/L） Concentration |
Ⅰ | KNO3 | 1900 | Ⅳ | Na2EDTA | 37.3 |
MgSO4·7H2O | 370 | FeSO4·7H2O | 27.8 | ||
| NH4NO3 | 1650 | Ⅴ | VB1 | 0.1 | |
KH2PO4 | 170 | VB6 | 0.5 | ||
Ⅱ | MnSO4·H2O | 16.9 | 煙酸 | 0.5 | |
ZnSO4·7H20 | 8.6 | 肌醇 | 100 | ||
H3BO3 | 6.2 | 甘氨酸 | 2 | ||
KI | 0.83 | Ⅵ | Cacl2·2H2O | 440 | |
Ⅲ | Na2MoO4·2H2O | 0.25 | |||
CuSO4·5H2O | 0.025 | Ⅶ | BA | 0.1～0.3 | |
CocL2 ·6H2O | 0.025 | ||||
Ⅷ | IBA | 0.2～0.7 |
標號 | 成份 | 配100ml的母液(200倍)稱取量（mg） | 配1L培養基吸取量(ml) |
1 | NH4NO3 | 33,000 | 5 |
2 | KNO3 | 38,000 | 5 |
3 | KH2PO4 | 3,400 | 5 |
4 | MgSO4·7H2O | 7,400 | 5 |
5 | CacL2·2H2O | 8,800 | 5 |
6 | MnSO4·H2O | 676 | 10 |
7 | ZnSO4·7H20 | 344 | 10 |
8 | H3BO3 | 248 | 10 |
9 | KI | 33.2 | 10 |
10 | Na2MoO4·2H2O | 10 | 10 |
11 | CocL2 ·6H2O | 1 | 10 |
12 | CuSO4·5H2O | 1 | 10 |
13 | FeSO4·7H2O | 556 | 5 |
14 | Na2EDTA | 746 | 5 |
15 | 肌醇 | 2,000 | 5 |
16 | 煙酸 | 10 | 5 |
17 | VB1 | 2 | 5 |
18 | VB6 | 10 | 5 |
19 | 甘氨酸 | 40 | 5 |
心得與體會
草莓屬於薔薇科草莓屬多年生草本植物,園藝學上分類屬於漿果類,草莓果實豔麗,柔軟多汁酸甜可口,芳香濃郁,營養豐富的高級果品,漿果中含糖6%-12%,含各種有機酸1.0%-1.5%.含蛋白質0.4%-0.8%,每一百克果實中含維生素C50-100毫克,比柑橘高兩倍,比蘋果葡萄高十倍,草莓中還含有其他種類的維生素和磷鐵等礦物質,無論從風味上來看,還是從營養價值上來看,草莓都當之無愧爲果中的上品,所以有人稱草莓爲“水果皇后”
通過本次實習使我對草莓的國內外科研發展史和生產現狀有所瞭解；對草莓的種類和品種有初步的認識；對草莓的對環境條件的要求有所瞭解；對草莓的繁殖和育苗尤其是草莓的組織培養法有一定的認識；對草莓的主要病蟲害的及其防治有一定的瞭解；爲我們以後從事草莓方面的工作與研究打下夯實的基礎。
草莓的國內外科研發展史和生產現狀
一、草莓的國外科研發展史和生產現狀
草莓植物起源於亞洲每週和歐洲，其栽培品種繁多，分佈於世界各地，西方各國大約是在14世紀末開始栽培林叢莓，15-17世紀栽培短蔓莓和麝香莓，1714年荷蘭從南美引進智利莓，1750年法國著名園藝家esne將智利莓和深紅莓雜交定名爲鳳梨莓，即世界栽培種的誕生。此後在西歐以英法爲中心的普遍開展草莓的雜交種的培育，使草莓在世界各地迅速發展起來。
到1990年全世界共有46個國家和地區生產草莓，世界總產量爲2357129噸，美國草莓的產量爲541033噸，居世界第一位，1920年美國農業部所屬的農業拭驗站開始改進草莓的總的園藝性狀的育種工作。其中佩茨維爾農業研究中心和馬里蘭州大學合作進行草莓的抗紅中柱病的育種，已選出60個有抗性的單系。
日本15世紀前開始食用野生草莓，18世紀末從荷蘭的西方諸國引進栽培種，19世紀初從美國引進六個品種，第二次世界大戰以後日本大量培養了本國的草莓品種。
在歐洲，1982年意大利的草莓產量居首位，年產量爲247000噸，居世界第二位，波蘭居歐洲第二位，年產量爲185000噸，居世界第四位。
二、草莓的國內科研發展史和生產現狀
我國16世紀的《本草綱目》內有關草莓的記載：就地生蔓，節接生根，每枝三葉，葉有齒劍四五月開花，五月結實鮮紅……。
我國雖然也是野生草莓的發源地之一，但大果型的草莓大部分從國外引進，而且草莓培育開始較晚，在見到的最早的記載是1915年帝俄僑民從莫斯科引進5000棵勝利品種到黑龍江亮子坡栽培，1918年又有一鐵路司機從高加索引入勝利栽培，1915年在河北由法國神父從法國引進雞心品種到正定天主教堂（石家莊果樹研究所）栽培。20世紀50年代瀋陽農學院（瀋陽農業大學前身）北京植物園從蘇聯東歐國家引進大量世界各地的品種，河北省農林科學院石家莊果樹研究所從1980年開始搜索草莓品種資源，和開展新品種選育工作，到目前已經保存300種國內外的草莓品種，1981年以後，黑龍江，吉林，河北，山西，山東，上海，天津等直轄市的一些科研單位和大專院校陸續開展了草莓的科學研究工作，分別對草莓的品種選育，秧苗繁殖，栽培技術，形態生理，病蟲害的防治等方面進行了研究。
草莓的種類和品種
草莓植物起源於亞洲、美洲和歐洲，在亞洲有八種，按草莓的基本染色體有二倍體、四倍體、六倍體、八倍體之分。其生理生態特性各異。
主要種類：野生草莓，西藏草莓，黃毛草莓，東方草莓，西南草莓，五葉草莓，纖細草莓，西域草莓，智利草莓，橢圓草莓，短蔓草莓，麝香草莓，西美洲草莓。
草莓的栽陪種類繁多，當今世界有2000多種，但大面積栽培僅幾十種，我國目前栽培草莓的品種大體有三部分。一栽培歷史較長的老品種，二國內選育的品種，三引進的國外品種。有關草莓的種類和品種參見《草莓生產技術大全》郝保春主編，中國農業出版社出版。
草莓對環境條件的要求
對溫度的要求：草莓植株生長的適宜溫度爲18-23℃。春季生長如遇到-7℃的低溫會受凍，-10℃時大多數植株會凍死，根系在2℃開始活動，10℃時開始形成新根根系的最適生長溫度15-20℃，地上部在5℃時開始萌芽，莖葉開始生長到15℃時爲緩慢生長期，草莓的生長髮育和光合作用的最適溫度20-25℃，5℃以下是草莓休眠的所需的溫度。
對光照的要求；草莓不同的發育時期對光照的要求不同，在開花和結果時期，和旺盛生長期適宜在12-15小時的長日照，在花芽分化期要求10-12小時的短日照，和較低的溫度，18小時的日照下生長旺盛，但不能形成花芽，甚至不能開花結果，草莓在花芽分化前經受短日照，在花芽分化以後經受長日照處理能促進花芽發育和開花。
對水分的要求：草莓的整個生長季節土壤的含水量爲60%左右，便可以滿足其生長髮育的要求。
對土壤的要求：在砂質土壤上如果多施有機肥，勤澆水草莓着色好，含糖量高。成熟期可提前4-5天，草莓適宜在微酸性和中性的土壤中生長，要求PH值5.8-6.5PH值在4以下或8以上，就會出現生長髮育障礙，表層有機質含量達到1.5%-2%才能生長良好，才能獲得優質高產。
草莓對土壤中氮、磷、鉀含量有一定要求。
草莓的繁殖與育苗
繁殖方法：匍匐莖分枝繁殖法、新莖分枝繁殖法、組織培養繁殖法、種子繁殖法。
育苗的方法：假植育苗、高山育苗、營養鉢育苗、無土栽培育苗、遮光育苗、夜冷育苗。本次實習主要應用組織培養繁殖育苗。
組織培養法的具體步驟：
1接種分化、選取強壯粗實的短縮莖，除去葉，切下頂部放入消毒液後，用清水洗淨，在無菌條件下切取莖尖約3毫米，置入無菌培養基的三角瓶內，放入無菌室恆溫22-26℃，培養30-75天，培養成1.5-2.0釐米的無根苗30-50株。
2繼代繁殖、將培養出的無根苗進一步擴大繁殖，分成5-10瓶，培養7-15天，又可以長滿無根苗，可以連續十代。根據生產需要決定繼代培育次數。
3生根培養、採用某些激素配成一定濃度和適宜比例的培養液，將無根苗在三角瓶培養液中培養，可促使其髮根。
4馴化到自養階段、由試管移植到盆內，於18-25℃溫度下培養15-20天即成無病毒苗，再進入苗圃培育。
主要病蟲害與防治
引起草莓的主要病害：草莓病毒病、草莓灰黴病、草莓白粉病、草莓炭疽病、草莓黃萎病、草莓蛇眼病、草莓輪紋病、草莓根腐病。
主要蟲害：蠐螬、蚜蟲、紅蜘蛛、葉甲、斜紋葉蛾。
防治：主要採取綜合防治的原理，是檢疫性病蟲害的採取植物檢疫策施，還有生物防治、農業防治、物理防治、化學防治等。例如對草莓病毒病的防治採用莖尖組織繁殖法，因病毒是通過維管束進行傳播的在莖尖生長點還沒有分化出爲維管束的部分是不帶病毒的，所以取草莓莖尖1-3毫米的分生組織進行培養可得到無病毒苗。
對主要的害蟲採用見效快的化學防治策施。
在做本次實驗的過程中,使我體會到了什麼叫認真和細心,我是一個粗心的的孩子,對待事情一直都是馬馬虎虎,做本次實驗需要配製大量的母液,它的需要量和配製培養基時的放入次序要弄清,一步錯誤滿盤結輸,分化培養基和生根培養基一定要分清,唯一的差別在於分化培養基內附加BA(6-苄基氨基嘌呤)而生根培養基中附加IBA(吲哚乙酸)。另外,培養基的煮沸時間和溫度一定要把握住，時間和溫度過高和過低都對培養基的成分和培養效果有一定的影響，過高可能導致培養基渾濁不清，有些成分可能受熱分解掉了。過低時培養基的受熱時間短對培育苗的生長髮育有一定的影響。培養基作好以後一定要貼好標籤，以防混淆了兩種培養基。在做本此實驗的過程中使我體會到什麼是耐心，在做外植體分化時，由於草莓的頂梢莖尖比較小，但是還得用鑷子將莖尖的外面的包葉剝去，用鑷子將幼葉一一剝去，剪取儘可能小的莖尖（０.１－０.３ＭＭ）有時候由於操作上的失誤造成草莓苗的病菌感染，需要將草莓苗進行消毒，時間和消毒劑的用量一定要謹慎操作，時間過長導致草莓苗的中毒死亡，消毒劑量濃度低消毒不徹底，爲了防止草莓苗的感染都在無菌臺上進行操作，實驗用的鑷子剪刀都要用一次就消毒一次，一般用酒精燈外焰燒幾分鐘就可以了，實驗時雙手也要進行酒精消毒，防止其他外來菌體的污染，再接種草莓苗時要靠近酒精燈的火焰不可太近也不能太遠。太近會使草莓苗受熱過高導致燙傷或燙死，太遠可能會導致其他細菌的污染，試管口的棉塞不能隨意亂放，以防污染。接種完以後將三角瓶放入恆溫箱裏進行培養，控制好光照、光周期、溫度、時間。並定期觀察草莓苗的生長和生根情況，有時由於沒有將草莓苗插入培養基內，生長一段時間後基部脫離了培養基，這時需要將草莓苗重新插入到培養基內，必要時換一個三角瓶培養基，再進行一次外植體莖尖的剪取，千萬不可馬虎偷懶大意。本次實習使我所學的知識與實踐得到了緊密結合，獲得了許多實戰性經驗，將許多知識運用到實踐中，獲得更好更高的豐產。在次此實習過程中，我院趙巖老師和甄文超教授給予了許多經驗性的指導，研究生劉雪靜學姐和其他師兄給予了許多技術性和實戰性的指導，在實習過程中各位老師學姐師兄給我講了許多爲人處事的道理，爲以後走向社會建設國家打下一個基礎。在次對各位老師學姐師兄表示衷心感謝。
總之，通過本次實習使我掌握了許多東西，受益匪淺。
